Caracterización del HLA en una familia colombiana

    ARTÍCULO ORIGINAL Caracterización del HLA en una familia colombiana endogámica con síndrome de Usher

    HLA detection in a colombian endogamyc family with Usher Syndrome

     

    Recibido: 18 de septiembre de 2018

    Aceptado: 25 de febrero de 2019

     

    Resumen

    El síndrome de Usher es una enfermedad autosómica recesiva que se caracteriza por presentar retinitis pigmentosa, hipoacusia neurosensorial congénita y disfunción vestibular. El propósito de este trabajo es realizar la caracterización de hla en una familia colombiana endogámica que presenta síndrome de Usher. La metodología consiste en que con un previo consentimiento informado se realizó una genealogía de la familia y a cuatro pacientes confirmados clínicamente con síndrome de Usher y a cuatro fenotípicamente sanos se les tomó 5 ml de sangre periférica en tubos de venopunción con edta para luego realizar el aislamiento del dna por la técnica de salting out, conservados en buffer te a -8 °C y ajustada la muestra a una concentración de 8 μg/ml. Posteriormente a través de la técnica de pcr-ssp de mediana resolución se caracterizaron los antígenos de hla *a, *b, *drb1 y *dqb1. Los resultados obtenidos indican que la familia oriunda del Departamento del Huila presenta una marcada endogamia detectándose que todos los hermanos afectados, sus padres son hermanos también y una de las parejas a su vez tuvo una niña afectada, por lo que sus abuelos y padres son hermanos. En lo referente al hla, los alelos más frecuentemente encontrados fueron a30 b42 dr1 dq5 y a3 b45 dr12 y dq7, que no están asociados a la enfermedad. Estos resultados sugieren que dada la endogamia que muestra esta familia se presenta una gran acumulación de polimorfismos y mutaciones, por lo que es necesario realizar un proceso de asesoría genética para disminuir el riesgo de recurrencia.

    Abstract

    Usher syndrome is an autosomal recessive disease characterized by retinitis pigmentosa, congenital sensorineural hearing loss and vestibular dysfunction. The purpose of this work was to characterize hla in an inbred Colombian family that presents Usher Syndrome. The Methodology consisted in that a genealogy of the family was made and previous informed consent, from four patients clinically confirmed with Usher Syndrome and four phenotypically healthy patients 5 ml of peripheral blood were taken in venipuncture tubes with edta and then the dna isolation was performed with the technique of salting out, preserved in te buffer at -8 °C and adjusted the sample to a concentration of 8 μg/ml. The hla *A, *B, *DRB1 and *DQB1 antigens were then characterized by the medium-resolution pcr-ssp technique.

     

     

    Introducción

    Desde el punto de vista epidemiológico se estima que más de 690 millones de personas alrededor del mundo tienen lazos de consanguinidad, esto se da principalmente como medio para preservar la estructura familiar y adquirir diversos beneficios como económicos, sociales, culturales, entre otros.1 Colombia no es ajena a este acontecimiento, ya que existe evidencia desde la era precolombina en el reconocimiento de síndromes genéticos, principalmente autosómicos recesivos, los cuales fueron documentados a través de figuras en arcilla. A nivel de Suramérica, Colombia es el tercer país en mostrar mayor presencia de consanguinidad dada principalmente entre primos hermanos en regiones como la costa norte y la isla de providencia, aunque el número de estudios genéticos es limitado.2 La variabilidad genética se define como la tendencia de los genotipos de una población a diferenciarse, los genomas humanos muestran una variación segmentaria del número de copias. Las deleciones y duplicaciones raras y de novo, que a menudo son grandes, son factores de riesgo conocidos en muchas enfermedades humanas. Además, miles de deleciones y duplicaciones más pequeñas se segregan en la población humana, muchas de las cuales contribuyen potencialmente a fenotipos complejos.3 Los estudios de variabilidad genética como medio de identificación humana inició con el análisis de los grupos sanguíneos, continuando con proteínas séricas leucocitarias y eritrocitarias para después abrirle campo al sistema de Antígenos Leucocitarios Humanos (hla, por sus siglas en inglés de Human Leukocyte Antigen). El complejo mayor de histocompatibilidad (cmh) humano se divide en tres regiones del cromosoma 6p21.3: clase II (centroamérica), clase III y clase I (telomérica). El cmh codifica proteínas altamente polimórficas, muchas de las cuales están asociadas con el sistema inmune. Los productos de los genes de clase I polimórficos clásicos son el antígeno leucocitario humano-A (hla-a), hla-b y hla-c. 4 Los estudios del sistema hla y la determinación de sus correspondientes antígenos realizados en África, Asia, Europa y América han tenido diversas aplicaciones y se consideran herramientas fundamentales en estudios de evolución, diversidad humana, asociación a enfermedades y genética de poblaciones. Estos estudios también han mejorado el conocimiento de las frecuencias haplotípicas, útiles en el diseño de programas de trasplante de órganos, para la selección adecuada de la pareja donador-receptor.5 En los últimos años se ha dilucidado la función del sistema hla como lo son el de reconocimiento antigénico y regulador del sistema inmunológico en seres humanos como parte del complejo mayor de histocompatibilidad. El sistema de antígenos leucocitarios humanos (hla) del complejo mayor de histocompatibilidad (mhc) contiene una numerosa familia de genes localizados en el brazo corto del sexto cromosoma (6p21.1-6p21.3). Estos antígenos se expresan de manera autosómica y codominante, y se heredan de ambos padres, por lo que cada individuo expresa un antígeno de origen paterno y uno de origen materno para cada uno de los loci.6 La relevancia de esto es debido a que presenta un elevado polimorfismo, lo que ha generado un interés científico en realizar la descripción antigénica y en evaluar la frecuencia de dicho polimorfismo en las poblaciones de interés. Las frecuencias génicas y haplotípicas generan información de gran relevancia acerca de la composición genética y el comportamiento de los genes en la población, esta información nos permite identificar enfermedades que tienen cierto grado de predisposición genética, especialmente las enfermedades de origen autoinmune, las cuales presentan una mayor relación con alteraciones en ciertos alelos hla y el entendimiento de los mecanismos moleculares responsables del desarrollo de enfermedades.7 El objetivo de este trabajo consiste en la evaluación de variantes asociados a los marcadores de histocompatibilidad por medio de la caracterización de hla en un grupo familiar altamente endogámico con síndrome de Usher en el departamento de Huila, Colombia.

     

    Materiales y métodos

     

    Se seleccionó una familia constituida por ocho integrantes del sur de Colombia, localizada en los municipios de la Plata y Garzón, Huila; de los cuales cuatro de estos acudieron a la consulta de Oftalmología por presentar disminución de la agudeza visual progresiva hasta llegar a ceguera asociada a sordera progresiva, y los otros cuatro asintomáticos asistieron a consulta como control por antecedentes familiares, se realizaron historias clínicas completas de cada paciente, seguido de un examen oftalmológico completo, además de audiometría. El patrón de presentación hizo sospechar una enfermedad de origen genético. Previo firma de consentimiento informado se les tomaron 5 ml de sangre periférica en tubos de venopunción con edta para luego realizar el aislamiento del dna por la técnica de salting out, conservados en buffer te a -8°C y ajustada la muestra a una concentración de 8 μg/ml. Posteriormente a través de la técnica de pcr-ssp de mediana resolución se caracterizaron los antígenos de hla *a, *b, *drb1 y *dqb1.

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